载体蛋白偶联

肽-载体蛋白衔接多用于制备抗毒素类抗体，单独的单个通常通常小小的不足以激起充分的免疫反应，而带有很多抗原表位的载体蛋白有利于刺激辅助性T细胞，进一步诱导B细胞免疫反应。合生生物偶联蛋白主要如下几种：

KLH（Keyhole Limpet Hemocyanin），即血蓝蛋白，由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因此是最常被替换的载体蛋白。

BSA（牛血清白蛋白），即牛血清白蛋白，属于最稳定的和可溶的白蛋白。BSA的不利之处在于在很多实验中，它被当作封闭剂使用，如果多肽-BSA偶联物的抗血清用于这样的检测分析中，通常会出现假阳性，因为这些血清含有抗BSA的抗体。

OVA（Ovalbumin），即鸡卵白蛋白，它可作为第二载体蛋白去验证抗体是否仅针对靶向而并非载体蛋白（如BSA）。

对在动物体内产生免疫反应而言，大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等偶联之后，不仅能增加抗原的大小，也能增强免疫性。我们可以提供与KLH,BSA和OVA蛋白的偶联。大多数客户选择与KLH交联，因为KLH的免疫性更好，而且BSA在很多实验中作为Blocking试剂，由于动物体内既会产生对多肽的抗体也会产生对载体蛋白的抗体，这样会出现假阳性。

KLH，BSA,OVA是分子量十分巨大的蛋白，有几百万Da，所以在其分子表面有大量的活性基团，最常用于偶联的是伯胺基团。小的多肽通常也带有不同基团可以用于偶联，常用的有伯胺基团，羧基和巯基。
多肽与KLH的偶联就是利用这些基团，再通过交联剂(crosslinker)，将多肽上的巯基/羧基/伯胺与KLH上的伯胺相连，从而形成共价偶联，制备成完全抗原，用于免疫动物获得抗体。所以偶联的伯胺应该是来自于赖氨酸侧链和N端，而偶联的羧基则来自于天冬氨酸，谷氨酸和C端，巯基则来自于半胱氨酸。至于偶联上去的数量，和加入的肽段，交联剂，KLH的摩尔比例有关。通常一分子KLH上可能会偶联上百个肽段。

偶联方法

我们用MBS活化载体蛋白，这样能将载体蛋白上面的自由-SH与多肽末端的Cys的侧链-SH连接起来，这种方法直接，特异性高，而且稳定，通常选择对免疫不重要的一端进行交联。 EDC活化载体上的-COOH，将载体的-COOH和多肽的-NH2连接起来也是一种可行的方法。但我们只建议在多肽序列中有多个Cys时采用该方法。如果肽链中含有多个-COOH或-NH2基因，不建议使用该方法，因为会造成多重点交联的情况，使多肽结构受影响。常用载体蛋白除KLH外，还有BSA，OVA等，KLH的优势是它不干扰ELISA或Western Blot等实验。

KLH偶联溶液混浊的原因

KLH是一个很大的并且聚合的蛋白。因为它的结构和大小，它在水中的溶解度是很有限的，因此是乳状，这并不影响它的免疫性，这种混浊的溶液可以直接免疫动物。

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